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關(guān)于熒光定量PCR的應(yīng)用,您都知道多少呢

更新時(shí)間:2020-12-07瀏覽:1957次

   關(guān)于熒光定量PCR的應(yīng)用,您都知道多少呢

  熒光定量PCR是在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),通過(guò)實(shí)時(shí)檢測(cè)擴(kuò)增反應(yīng)中每個(gè)周期產(chǎn)物的熒光信號(hào),然后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量分析未知模板的方法。以探針?lè)晒舛繛槔涸赑CR擴(kuò)增中,加入一對(duì)引物,并加入一個(gè)特異的熒光探針。探針兩端分別標(biāo)記有報(bào)告熒光基團(tuán)和猝滅熒光基團(tuán)。
  熒光探針組的熒光信號(hào)在擴(kuò)增開(kāi)始時(shí)被任何一組熒光探針?biāo)钄啵瑹晒庑盘?hào)被熒光探針*阻斷,從而使熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)能夠接收到熒光信號(hào),即每個(gè)擴(kuò)增出的DNA鏈中,都有一個(gè)熒光分子形成,使熒光信號(hào)的積累與PCR產(chǎn)物的形成*同步。

熒光定量PCR

  關(guān)于熒光定量PCR的應(yīng)用分析:
  1、核酸定量分析:對(duì)傳染性疾病進(jìn)行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的檢測(cè),轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物基因拷貝數(shù)的檢測(cè),RNAi基因失活率的檢測(cè)等。
  2、基因表達(dá)差異分析:比較經(jīng)過(guò)不同處理樣本之間特定基因的表達(dá)差異(如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等),特定基因在不同時(shí)相的表達(dá)差異以及CDNA芯片或差顯結(jié)果的確證
  3、SNP檢測(cè):檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性(SNP)對(duì)于研究個(gè)體對(duì)不同疾病的易感性或?qū)μ囟ㄋ幬锏牟煌磻?yīng)具有重要意義。由于SNP的結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,一旦知道SNP的結(jié)構(gòu)和信息量,采用這種技術(shù)進(jìn)行高通量的SNP檢測(cè)將會(huì)變得簡(jiǎn)單而準(zhǔn)確。
  4、甲基化檢測(cè):甲基化與許多人類疾病有關(guān),尤其是癌癥。DNA在擴(kuò)增前經(jīng)過(guò)處理,使未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶則不受影響。用特異性引物和TaqMan探針區(qū)分甲基化和非甲基化DNA,不僅簡(jiǎn)便而且靈敏。
  5、產(chǎn)前診斷:人們不能治療由遺傳物質(zhì)變化引起的遺傳病。到目前為止,我們只能通過(guò)產(chǎn)前監(jiān)測(cè)來(lái)減少病兒的出生,從而預(yù)防各種遺傳病的發(fā)生,從母體外周血中分離胎兒DNA,用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Y性別決定區(qū)基因是一種無(wú)創(chuàng)的方法。

 

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